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    ELISA試劑盒法檢測研討

    發布時間: 2017-11-09  點擊次數: 1462次

    ELISA試劑盒基因現已整合到銀耳基因組中;RT-PCR成果顯現,在銀耳細胞中可以動物ELISA試劑盒檢測到人胰島素基因的mRNA;Southern雜交成果表明人胰島素基因以單復制的方式整合到銀耳基因組DNA中。本試驗經過設置農桿菌與銀耳芽孢不同共培育時刻、誘導劑乙酰丁香酮的濃度、銀耳芽孢及農桿菌ELISA試劑盒濃度等要素對轉化功率影響,成果在乙酰丁香酮濃度為500μmol/mL、銀耳芽孢濃度為108個/mL、農桿菌OD=0.5及共培育時刻為2d時,轉化功率zui高,為310個轉化子/108個銀耳芽孢。轉化子轉接5代后對潮霉素仍有抗性,說明外源基因在銀耳芽孢中可以不亂遺傳。在試驗室已開始樹立的農桿菌EHA105介導銀耳轉基因辦法的基礎上。
    ELISA試劑盒以銀菌株Tr21-01為動身菌株,經過凍融法將帶著有潮霉素磷酸轉移酶(Hph)基因為遺傳符號及人胰島動物ELISA試劑盒素基因(BAC)為意圖基因的質粒pBHg-BCA導入根癌農桿菌GV3101,LBA4404和AGL-1中,并進一步介導轉究。試驗結L-1具有較高的轉化率;GV3101轉化率較低,且假陽性較高;LBA4404無抗性菌落長出。此成果表明不同的農桿菌侵染銀耳芽孢才能具有差異性,且對受體侵染具有一定的特異性。本試驗以農桿菌EHA105為參照菌株,ELISA試劑盒對農桿菌AGL-1介導轉化銀耳進行研究。基于農桿菌介導轉基因受許多要素的影響,本試驗從農桿菌與銀耳芽孢共培育時刻、銀耳芽孢濃度、農桿菌濃度、誘導劑乙酰丁香酮(AS)的濃度、轉率等方面進行優化。ELISA試劑盒其轉化條件優化成果為:AGL-1菌液OD值為0.4~0.5,AS誘導培育濃度為250μg/mL、共培育濃度為150μ耳芽孢濃度為10~8/mL,共培育72h轉化率zui高,可達500個/10~8,且陽性菌落為89%;EHA105菌液OD值為0.4~0.5。

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