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多聚螯合物酶法--EPOS法
發(fā)布時(shí)間： 2011-11-22 點(diǎn)擊次數(shù)： 3214次EPOS法（enhanced polymer one-step stainning）
EPOS法（enhanced polymer one-step stainning）是Dako公司近年來推出的一步染色法，它不同于以往的酶標(biāo)記特異性抗體法，其原理（圖4—13）是采用一種具有惰性的多聚化合物（葡聚糖）為骨架，將特異性抗體和HRP結(jié)合在一起，形成HRP—多聚化合物—特異性抗體巨大復(fù)合物，該復(fù)合物內(nèi)不含第二抗體及親和素。染色時(shí)，只需在組織切片上加入相應(yīng)的酶標(biāo)記特異性抗在組織切片上加入相應(yīng)的酶標(biāo)記特異性抗體EPOS試劑，孵育30～60min即可完成。勿需再加酶標(biāo)記第二抗體。EPOS法操作流程如下。
（1）石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，PBS洗3minX3次。
（2）蛋白酶消化或抗原修復(fù)（AR），PBS洗3minX3次。
（3）0．3％過氧過氫（Hz02）處理5min。
（4）蒸餾水洗，置于PBS中洗5min。
（5）加入相應(yīng)的DakoEPOS／HRP試劑，室溫孵育30～60min
（6）PBS洗3minX3次。
（7）0．04％DAB-0．03％Hz02顯色8～12min。
（8）水洗，復(fù)染，常規(guī)樹膠封片。
EPOS法只需1次孵育，是目前zui簡便的方法。其特異性較高，基本無背景染色，敏感性雖然不如其他二步多聚螯合物方法，但符合一般工作需要。EPOS法不足之處是現(xiàn)有商品化的酶標(biāo)記特異性抗體的品種不全，目前只有20余種。此外，試劑價(jià)格昂貴，尚不能廣泛推廣應(yīng)用。
EPOS法（enhanced polymer one-step stainning）