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小鼠ELISA試劑盒樣本處理五部曲
發(fā)布時間： 2015-07-03 點擊次數(shù)： 2747次小鼠ELISA試劑盒樣本前處理是酶聯(lián)免疫試驗中關(guān)鍵的一步，稍有不慎將導致實驗滿盤皆輸，如何安全，快捷的處理樣本，樣本處理五部曲助您精彩實驗。
1 均質(zhì)
組織樣本:肉、肝食品類切細，用絞肉機反復絞碎，混合均勻。
水產(chǎn)樣本：去除樣品的非食用部分，食用部分切細，用均質(zhì)器均漿；原料表面較臟時,需適當用蒸餾水清洗。
蛋類：鮮蛋去殼，蛋黃和蛋白充分混勻。
水果、蔬菜類：先用水洗去泥沙，然后除去表面的水分，取食用部分。
2 振蕩提取
將提取溶劑加入到裝有樣品的具塞容器中，振蕩，使提取溶劑與容器內(nèi)的樣品充分接觸以深入到樣本組織內(nèi)部，提取待測組分。
2.1振蕩方式：振蕩器上進行上下、往返式振蕩、手搖式上下振蕩。
2.2 在組織樣本中加入有機溶劑之間提取時，應邊加邊振蕩，防止組織凝結(jié)成團，不利于提取。
3. 在用有機溶劑提取過程中，如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，解決的方法有：①用細頭輕輕的攪拌，破壞乳化后，再重復離心。②再加入適量的提取劑，重新振蕩。注意離心后要保證樣本的稀釋倍數(shù)不變。
4 濃縮
由于凈化過程中引入的溶劑，可能會降低待測組分的濃度或者不適宜直接分析，需要去除全部有機溶劑。即試劑盒前處理步驟中把樣本在60℃氮氣下吹干，小鼠ELISA試劑盒再用復溶液溶解干燥殘留物。
濃縮方式：
氮氣吹干除雜、壓縮空氣吹干除雜。
注意：
1在吹干樣本之前，用甲醇清洗針頭，防止雜質(zhì)干擾。
2在吹樣本時，針頭應在液面上空，避免與樣本接觸，防止產(chǎn)生交叉污染。
3樣本吹干后應立即取下，避免吹的時間過長，影響zui終檢測結(jié)果。
4不同的藥物，吹干后樣本的保質(zhì)期不同，提倡待樣本回到室溫后立即復溶。
5 凈化
經(jīng)過提取的待測組分中通常含有一些會干擾試劑盒中抗原抗體反應的雜質(zhì)或者是含有與待測物結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì)。將待測組分與雜質(zhì)分離的過程，我們稱為試劑盒中樣本的凈化。在我們現(xiàn)有的試劑盒前處理方法中涉及到的zui常見的凈化是：液液分配法。
比如：用復溶液溶解干燥殘留物之前先加入適量的正己烷，在加入正己烷和復溶液渦動后如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，可以60℃水浴加熱，至乳化現(xiàn)象消失或減弱后，加大離心轉(zhuǎn)速進行離心。溫馨提示Elisa實驗使用注意事項：
1、小鼠ELISA試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2、濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果
3、各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4、請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔OD值的)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5、嚴格按說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
6、本試劑不同批號組分不得混用。
7、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9、底物請避光保存。
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