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大鼠E-選擇素（E-selectin） ELISA 檢測試劑盒說明書

發布時間： 2010/8/3　　點擊次數： 1143次

提供商：	研域（上海）化學試劑有限公司	資料大小：
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詳細介紹：

大鼠E-選擇素（E-selectin） ELISA 檢測試劑盒

用途：

大鼠E-selectin ELISA試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、緩沖液中細胞上清液及各種體液中的E-selectin 。本試劑盒可以檢測天然和重組的E-selectin 。本試劑盒于科研、而非用于臨床診斷。

試驗原理：

大鼠E-selectin 試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知E-selectin 濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將E-selectin 和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中E-selectin 的濃度呈比例關系。

試劑盒內容及其配制

試劑盒成份（2-8℃保存）	96孔配置	48孔配置	配制
96/48人份酶標板	1塊板（96T）	半塊板（48T）	即用型
塑料膜板蓋	1塊	半塊	即用型
標準品：400ng/ml	1瓶（0.6ml）	1瓶（0.3ml）	按說明書進行稀稀
空白對照	1瓶（1.0ml）	1瓶（0.5ml）	即用型
標準品稀釋緩沖液	1瓶（5ml）	1瓶（2.5ml）	即用型
生物素標記的抗E-selectin抗體	1瓶（6ml）	1瓶（3.0ml）	即用型
親和鏈酶素-HRP	1瓶（10ml）	1瓶（5.0ml）	即用型
洗滌緩沖液	1瓶（60ml）	1瓶（30ml）	按說明書進行稀釋
底物A	1瓶（6.0ml）	1瓶（3.0ml）	即用型
底物B	1瓶（6.0ml）	1瓶（3.0ml）	即用型
終止液	1瓶（6.0ml）	1瓶（3.0ml）	即用型

自備材料

1．蒸餾水。

2．加樣器：5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。

3．振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性

1．此試劑盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV為陰性，但沒有實驗室可*保證此血制品不會傳染肝炎、AIDS或其它傳染病，依據當地的安全條例處理本試劑盒里的成份及血清和血漿等樣品。

2．避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

3．實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

4．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項

1．試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

2．實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

3．不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

4．使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5．使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6．洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

7．底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

8．加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

9．按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法

1、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備

1．標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：

400 ng/ml	（6號標準品）	原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
200 ng/ml	（5號標準品）	100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
100 ng/ml	（4號標準品）	100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
50 ng/ml	（3號標準品）	100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
25 ng/ml	（2號標準品）	100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
12.5 ng/ml	（1號標準品）	100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 ng/ml	（空白對照）	原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

2．洗滌緩沖液（20×）的稀釋：蒸餾水20倍稀釋。

操作步驟

1．使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。

2．根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。

3．加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

4．甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作四次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

5．每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6．甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作四次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

7．每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育15分鐘。避免光照。

8．取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。

9．在450nm波長處測定各孔的OD值。

建議使用的實驗方案

標準品濃度（ng/ml）

400

樣品

200

樣品

100

樣品

12.5

樣品

結果分析

以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的E-selectin 標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的E-selectin 含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

局限

6號標準品以上的結果為非線性的，根據此標準曲線無法得到的結果。

試劑盒性能

1．靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。

2．特異性：不與人其它細胞因子反應。

3．重復性：板內、板間變異系數均小于10%。

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