現(xiàn)貨人p53 蛋白ELISA檢測試劑盒的試驗方法

發(fā)布時間： 2012/11/28　　點擊次數(shù)： 652次

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人p53 蛋白ELISA檢測試劑盒

試驗原理：
　　　　p53 protein試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知p53 protein濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將p53 protein和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中p53 protein的濃度呈比例關(guān)系。

自備材料
蒸餾水。
加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

人p53 蛋白ELISA檢測試劑盒

操作注意事項
試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

人p53 蛋白ELISA檢測試劑盒

操作步驟
使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內(nèi)。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結(jié)果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。

局限
6號標準品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到的結(jié)果。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應。
3. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

人p53 蛋白ELISA檢測試劑盒

結(jié) 果判斷與分析
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的p53 protein標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的p53 protein含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
3、檢測值范圍：0-80IU/ml
4、敏感度： 0.1 IU/ml
Chymostatin 胰凝乳蛋白酶抑制劑 [9076-44-2] 5mg
Chymotrypsinalpha- TLCK Treated TLCK-treated 胰凝乳蛋白酶 [9004-07-3] 25mg
Chymotrypsinalpha- TLCK Treated TLCK-treated 胰凝乳蛋白酶 [9004-07-3] 100mg
Chymotrypsinalpha 胰凝乳蛋白酶 [9004-07-3] 100mg
Chymotrypsin 胰凝乳蛋白酶 [9004-07-3] 1g
Chymotrypsin 胰凝乳蛋白酶 [9004-07-3] 5g
Chymotrypsinogen A 胰凝乳蛋白酶原 A [9035-75-0] 1g
Chymotrypsinogen A 胰凝乳蛋白酶原 A [9035-75-0] 5g
Chymotrypsinogen 胰凝乳蛋白酶原 / 1g
Chymotrypsinogen 胰凝乳蛋白酶原 / 5g
Cinchonine 辛可寧 [118-10-5] 10g
Cinnamic acid 肉桂酸 [140-10-3] 50g

若需要了解試劑盒的詳細信息，詳情請：謝明：

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