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發(fā)布時(shí)間： 2012-10-10 點(diǎn)擊次數(shù)： 2564次
雙層瓊脂培養(yǎng)法
1. 將之寄主細(xì)菌以液體培養(yǎng)法于適當(dāng)溫度下培養(yǎng),一般培養(yǎng)16~24小時(shí).
2. 以1% peptone為稀釋液,將噬菌體原液做10倍序列稀釋,一般稀釋至107倍即可.
3. 取噬菌體稀釋液100 μl 與寄主菌液300 μl均勻混合,靜置15分鐘使其感染.
4. 將上述混合液加入5 ml 冷卻至45℃的0.7﹪瓊脂培養(yǎng)基中,均勻混合后立即平鋪于已凝固的1.8﹪瓊脂培養(yǎng)基上.
5. 將平板置于適合的溫度下,一般培養(yǎng)8~24小時(shí),待溶菌斑產(chǎn)生后觀察并計(jì)算其數(shù)目.
6. 噬菌體效價(jià)（pfu/ml）＝溶菌斑數(shù)×稀釋倍數(shù)×取樣量折算數(shù)
例如:噬菌體原液稀釋倍數(shù)為107,取樣量測(cè)定量為0.1ml （則取樣量折算數(shù)為10）,三個(gè)平板的溶菌斑數(shù)目分別為275、252、263,則噬菌體原液的效價(jià)為:1/3（275+252+263）×107×10＝2.63×1010 （pfu/ml）
點(diǎn)滴法
1. 將之寄主細(xì)菌以液體培養(yǎng)法于適當(dāng)溫度下培養(yǎng),一般培養(yǎng)16~24小時(shí).
2. 取300 μl寄主細(xì)菌懸浮液加入5 ml冷卻至45℃的0.7﹪瓊脂培養(yǎng)基中,均勻混合后立即平鋪于已凝固的1.8﹪瓊脂培養(yǎng)基上,并靜置30分鐘以上使其凝固.
3. 以1% peptone為稀釋液,將噬菌體原液做10倍序列稀釋,一般稀釋至107倍即可.
4. 將平板劃分為八個(gè)區(qū)域,以pipetman取不同稀釋倍數(shù)之噬菌體稀釋液各1 μl,分別接種于不同的區(qū)域上.
5. 將平板置于適合的溫度下,一般培養(yǎng)8~24小時(shí),待溶菌斑產(chǎn)生后觀察并計(jì)算其數(shù)目.一般噬菌體濃度太高的區(qū)域會(huì)融合成一個(gè)大的溶菌斑,而濃度適中的區(qū)域會(huì)形成肉眼可觀察的溶菌斑.
6. 噬菌體效價(jià) （pfu/ml）＝溶菌斑數(shù)×稀釋倍數(shù)×取樣量折算數(shù)
例如:噬菌體原液稀釋倍數(shù)為106,取樣測(cè)定量為0.001 ml （則取樣量折算數(shù)為1000）,三個(gè)滴定點(diǎn)的溶菌斑數(shù)目分別為15、18、16,則噬菌體原液的效價(jià)為:1/3（15+18+16）×106×1000＝1.63×1010 （pfu/ml）